革兰氏染色——这个由丹麦科学家汉斯·革兰在1884年发明的技术,至今仍是微生物实验室的基石。依据细菌细胞壁结构和化学成分的不同,通过简单的紫色与红色区分,它告诉我们眼前的细菌是革兰氏阳性(G+)还是革兰氏阴性(G-),为细菌鉴定、感染诊断、抗生素选择提供了最初步却至关重要的依据。然而,正是这项看似基础的技术,却让无数检验人员又爱又“恨"。
标准五步法,步步是挑战
第一步:涂片与热固定
制备涂片:取一滴无菌水或生理盐水于载玻片中央,用无菌接种环挑取少量菌落,均匀涂布成直径约1厘米的薄层膜。
风干:在空气中自然风干。
固定:将有菌膜的一面朝上,快速通过酒精灯火焰2-3次。
取菌、涂片、过火固定——听起来简单,但菌量多少算合适?火焰温度多高算刚好?菌量不足影响镜检,过热则导致细胞变形。全凭手上功夫,新手往往需要数月练习才能稳定发挥。
第二步:结晶紫初染(1分钟)
用结晶紫染液覆盖菌膜,开始计时,染色1分钟。
用缓流自来水轻轻冲洗,洗去多余染液,甩干玻片上多余水分。
染液是否均匀?是否沉淀?这些细节都直接影响最终效果。
第三步:碘液媒染(1分钟)
用碘液覆盖菌膜,染色1分钟。
再次用细缓水流轻轻冲洗,甩干。
碘液与结晶紫形成复合物,这是染色成败的关键化学反应之一。
第四步:乙醇脱色(5-15秒)
将载玻片倾斜,用95%乙醇滴流冲洗涂片,直至流下的乙醇几乎无色(此过程通常仅需5-15秒,具体时间需经验判断)。
立即用缓流水轻轻冲洗,脱色结束。
这是整个流程中变数最大的一步。脱色不足,G-菌可能被误判为G+;脱色过度,G+菌又会“变红"成为假阴性。短短几秒钟的差异,可能导致相反的结论。
第五步:沙黄复染(30-60秒)
最后一步的复染为G-菌“上色",完成最终的色彩区分。
用沙黄染液覆盖菌膜,复染30秒至1分钟。
用细缓水流冲洗干净,用吸水纸轻轻吸干或自然风干,镜检观察。

左:革兰氏阴性菌(G-);右:革兰氏阳性菌(G+)
常见问题解析:为什么你的结果可能不可靠?
脱色环节如何把握?为什么说“失之毫厘,谬以千里"?
脱色是革兰氏染色中最关键也最难标准化的一步,全凭操作者经验控制时间:
脱色不足:G-菌本应被脱去的结晶紫-碘复合物未被洗净,复染后仍呈紫色,导致假阳性
脱色过度:G+菌的复合物也被溶出,最终被染成红色,造成假阴性
解决方案:需密切观察流下乙醇的颜色变化,新手建议用标准菌株对照练习。
为什么会出现结果不明确或颜色不典型?
菌龄过老:超过24-48小时的G+菌细胞壁可能降解,染色后呈紫红混杂
涂片过厚:脱色剂无法渗入菌膜深层,造成内部细菌脱色不匀
解决方案:使用18-24小时新鲜菌,制备薄而均匀的涂片。
染色后镜检,背景为什么有杂质或沉淀?怎么办?
多为染液沉淀或冲洗不当所致。
解决方案:染液需过滤使用,每一步冲洗后应将玻片充分沥干。
热固定时要注意什么?
固定不足:菌体在染色过程中被冲脱
过热固定:细胞变形破裂,影响形态判断
解决方案:玻片在火焰上快速通过2-3次,以不烫手背为宜。
为什么镜检时总找不到足够细菌?
取菌量不足
涂片后冲洗水流过猛,冲走菌膜
解决方案:挑取适量菌苔,所有冲洗步骤使用缓流水。
传统方法的三大困境
结果不一致:不同操作者、不同时间、不同状态,都可能得到不同的染色结果。
效率低下:单张玻片完整流程需6-10分钟,批量处理时更是耗时费力。
质量控制难:缺乏标准化流程,结果重复性难以保证。

破局:当经典技术遇上智能自动化
针对这些长期存在的实验室痛点,我们推出了HD-GM100型全自动革兰氏染色仪——一款真正实现革兰氏染色全流程自动化的设备,将传统依赖人工经验的繁琐步骤整合为智能化系统,可显著提升染色质量与操作效率。

自动化流程:上机后自动执行结晶紫初染→碘液媒染→乙醇脱色→品红复染→离心干燥全流程
程序可编程:内置9种预设程序,支持自定义各步骤时间与染色级别(1-9级)
智能控制:脱色时间精准可控,避免人工脱色不足或过度,杜绝假阳性/假阴性
干燥高效:染色时低速运转(20rpm),甩干时高速离心(≥1500rpm),快速完成玻片干燥

高通量处理:单批次支持1-24张玻片同时染色,最佳装片数12/16/24片
快速染色:标准流程最快≤4分钟,每小时可处理≥200张玻片
均匀染色:直线喷雾法精准覆盖每张玻片,避免交叉污染,保证染色均匀性
连续运行:支持批量连续作业,满足疾控、海关、科研等机构大规模检测需求

试剂节约:单张玻片试剂消耗仅0.5–1.5ml,智能控制用量
自动清洗:内置管路自动清洗程序,无需人工拆洗,维护简便
即开即用:出厂配置齐全(主机、玻片托盘、备用喷嘴、染料套装),降低启动成本

临床微生物实验室:快速准确的病原菌初步鉴定,为临床用药提供及时依据
疾控与公共卫生:大批量样本筛查,应对突发公共卫生事件
科研与教学:标准化染色结果,保障科研数据的可靠性;直观的教学演示工具
第三方检测机构:提升检测效率,保证报告质量

不仅仅是替代,更是进化
HD-GM100以自动化重塑革兰氏染色流程,为各类微生物实验室提供高效、一致、可追溯的染色解决方案,让染色标准化,让结果更可信。
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