菌落计数器是微生物实验室常用设备，用于平板菌落计数，核心是通过放大、照明辅助人工计数，部分型号可自动识别计数。以下为通用操作流程，不同品牌（如欧莱博、其林贝尔、赛默飞）细节略有差异，需结合仪器说明书调整。
一、实验前准备
仪器检查
检查电源线、数据线连接是否牢固，计数笔（或感应探头）、放大镜镜头是否清洁。
开启仪器电源，预热5-10分钟，确保显示屏、照明光源正常工作。
样品准备
待计数的平板需培养至菌落形态清晰（细菌一般培养24-48h，真菌48-72h），表面干燥无冷凝水。
标记平板信息（样品编号、稀释倍数等），避免混淆。
耗材与环境
准备酒精棉片、记号笔、计数记录表格。
操作环境保持清洁，避免杂菌污染平板；光线柔和，防止反光影响计数。
二、手动菌落计数器操作步骤
市面上多数实验室使用手动菌落计数器，核心流程如下：
放置平板
将培养皿倒扣在计数器的载物台中央，调整载物台位置，使平板完全处于放大镜视野内。
打开底部或顶部照明光源，调节亮度至菌落与培养基对比清晰，无刺眼反光。
设定参数（部分型号）
若仪器支持稀释倍数设置，按面板按键输入样品的稀释倍数（如10⁻⁴），仪器可自动计算最终菌落数。
部分仪器有计数模式选择（如总菌落计数、特定颜色菌落计数），按需切换。
开始计数
手持计数笔，从平板的一个边缘开始，按顺时针/逆时针方向有序扫描，避免重复或遗漏。
每发现一个菌落，轻按计数笔一次，仪器显示屏会自动累加计数数值；遇到融合的菌落簇（如菌苔边缘），若无法区分单菌落，按“一簇记为一个”或“按经验估算”（需在记录中注明）。
对于透明或微小菌落，可适当调节放大镜焦距，必要时借助菌落形态特征（大小、颜色、边缘）判断。
重复计数（平行验证）
同一块平板建议计数2次，两次数值误差应≤10%，取平均值；若误差过大，需重新计数。
同一稀释度至少计数2-3个平行平板，减少实验误差。
数据记录与计算
记录平板计数原始值、稀释倍数、平行平板数量。
计算公式：样品菌落总数（CFU/g或CFU/mL）=平板平均菌落数×稀释倍数÷接种量
示例：接种0.1mL稀释10⁻³的样品，平板平均菌落数为50，则总数=50×10³÷0.1=5×10⁵CFU/mL。
实验后清理
关闭仪器电源，拔下电源线。
用酒精棉片擦拭载物台、放大镜镜头、计数笔探头，去除培养基残留或污渍。
清理实验台面，将平板按生物安全要求分类处理（灭菌后丢弃）。
三、自动菌落计数器操作要点（进阶型）
自动菌落计数器通过图像识别技术计数，操作更高效，步骤如下：
放置平板，开启仪器，进入图像采集模式。
调节摄像头焦距和光源强度，拍摄平板清晰图像，部分仪器支持自动对焦。
在软件界面设置菌落识别参数（如菌落大小阈值、颜色范围），排除培养基杂质干扰。
点击“自动计数”，软件自动识别并统计菌落数，可手动修正误判的杂质或漏计的菌落。
导出数据至电脑，保存计数报告。
四、注意事项
计数规范：选择菌落数在30-300CFU的平板计数，超出此范围的平板数据无效（菌落过多易融合，过少误差大）。
生物安全：操作活菌平板时需佩戴手套、口罩，避免气溶胶污染；实验后平板需高压蒸汽灭菌。
仪器维护：定期校准计数精度，保持镜头清洁；避免仪器受潮、暴晒，长期不用时断开电源。
避免误差：计数时遵循“有序扫描”原则，可在平板背面划分象限，按象限计数；不同操作者计数前需统一判断标准。
