厌氧菌在有氧的情况下不能生长。要培养厌氧菌，必须创造一个无氧的环境。通常用加入还原剂的培养基，或用物理、化学方法去除环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。
1.厌氧缸法：接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。
2.厌氧袋：即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。塑料袋透明而不透气，内装气体发生管(有NaBH4的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿)、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育。
3.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。
4.厌氧培养装置：用于制造厌氧(氧浓度为0%)、微需氧(氧浓度为6%)和特殊氧气浓度(1%-18%)比例的厌氧和微需氧环境，适用于厌氧菌、微需氧菌和细胞培养等；用于食品安全国家标准GB4789要求的空肠弯曲菌，溶血性链球菌，双歧杆菌，乳酸菌和志贺氏菌检测；还可用于饮用天然矿泉水中的产气荚膜梭菌等需要厌氧、微需氧及特殊氧气浓度培养菌的分离培养；
HD-AN200型智能厌氧培养装置用于食品安全国家标准GB4789要求的空肠弯曲菌，溶血性链球菌，双歧杆菌，乳酸菌和志贺氏菌检测；还可用于饮用天然矿泉水中的产气荚膜梭菌等需要厌氧、微需氧及特殊氧气浓度培养菌的分离培养。
5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物(多是植物)，消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。
6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。焦性末食子酸与碱反应后耗氧。该法用于厌氧不严格的厌氧菌的培养，简单。如有梭状芽孢杆菌。
7.疱肉培养基：本身就是一个不需特殊设备的厌氧培养法。疱肉和肉汤装入大试管，液面封凡士林，造成无氧环境
