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如何优化厌氧培养箱的使用效果

更新时间:2024-11-13      点击次数:64
   厌氧培养箱是生物学实验室中的重要设备,用于在无氧或低氧环境下进行微生物培养、细胞培养等研究。为了提高其使用效率和培养效果,我们需要关注多个方面。
 
  一、准备工作
 
  1.环境要求:将厌氧培养箱放置在干燥、通风良好、无振动的地方,确保气源和电源连接正常。避免周围存在易燃易爆物品,以防发生意外。
 
  2.清洁与消毒:定期使用适当的消毒剂清洁培养箱内外表面,特别是操作台、门把手等高频接触区域。可以使用0.1%苯扎溴铵溶液或2%甲醛液擦拭工作台面及可能污染的死角,湿拖地面,保持培养箱的清洁卫生。
 
  3.检查设备状态:在每次使用前,仔细检查仪器的各个部件是否处于良好的工作状态,包括温度控制器、传感器、厌氧气体入口、排气阀和观察窗等。确保设备各项设施完备,能够正常运行。
 

 

  二、操作过程
 
  1.形成厌氧环境:
 
  -根据使用要求放置好必要的配件和器具,并向操作室内放入无毒塑料袋。
 
  -开启电源,打开温度控制器,调节至所需的培养温度。
 
  -向操作室内放入钯粒(封闭)和干燥剂,同时放入美兰指示剂(封闭),以监测厌氧环境的形成。
 
  -关紧取样室内外门,进行真空检查,确保密封性良好。
 
  -进行至少三次的气体置换,第一次和第二次通常使用氮气,第三次使用混合气体(如N2:H2:CO2=85%:10%:5%),以排除操作室内的空气。
 
  2.催化脱氧:打开钯粒除氧剂,接通除氧催化器电源进行催化除氧。一小时后打开美兰指示剂观察其变色情况,以确认操作室内是否达到厌氧环境。
 
  3.灭菌处理:开启紫外线灭菌灯,对室内进行灭菌处理。灭菌时间根据实际情况自定,但应确保充分灭菌,以减少微生物污染的风险。
 
  4.菌种置入和培养:
 
  -检查并关闭取样室的门,确保密封性。
 
  -将菌种放入取样室后,打开取样室外门并关闭外门。取样室充满氮气并更换三次,以确保厌氧条件。
 
  -接种棒灭菌器的应用:使用镍铬电热丝使电极短路以致变红进行灭菌。
 
  三、注意事项
 
  1.操作规范:建立和遵循标准操作规程(SOP),确保每次实验前净化系统至少运转1小时以上,同时开启净化台和紫外灯。严格按照操作流程进行实验,避免因操作失误导致实验失败或污染。
 
  2.无菌操作:操作人员在进入操作区域前,应穿戴无菌工作服、口罩和手套,确保个人卫生。在操作过程中,应避免大幅度或快速动作,以免搅动空气中的尘埃微粒。所有进入培养箱的物品必须经过严格的表面消毒处理。
 
  3.气体管理:确保仪器内的气体供应稳定,及时更换气体瓶和厌氧指示剂等。在操作过程中,避免在开启门的情况下进行操作,以免破坏厌氧环境。定期检查氧气、氢气和二氧化碳气体浓度,避免漏气。
 
  4.设备维护:定期检查仪器的各个部件,包括温度控制器、传感器、厌氧气体入口、排气阀和观察窗等,确保它们处于良好的工作状态。及时维修和更换损坏的部件,以保证设备的正常运行。
 
  5.环境监测:定期监测操作室内的微生物污染情况,包括沉降菌落计数和浮游菌测定,以确保环境符合无菌标准。使用适当的培养基进行环境微生物监测,如胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA),并在必要时加入中和剂,以避免假阴性结果。
 
  通过遵循以上步骤和注意事项,可以最大限度地提高厌氧培养箱的使用效率和培养效果,为生物学研究提供可靠的实验数据。
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