微需氧环境难把控？临床弯曲菌分离培养鉴定实操攻略

更新时间：2026-09-24 点击次数：34

厌氧菌/微需氧菌规范化检测全流程解决方案专题・Ⅲ

弯曲菌是临床非常典型的致病性微需氧菌，以空肠弯曲菌、结肠弯曲菌最为常见，是引起急性感染性腹泻、肠道炎症的重要病原，严重时可诱发菌血症、免疫相关并发症，对免疫力低下人群风险更高。

不同于一般需氧菌，弯曲菌无法在空气、无氧环境正常生长，仅能在特定微需氧气体比例下稳定增殖。这也是临床微生物室弯曲菌检出率偏低、漏检率高的核心原因。从临床样本接收、前处理、增菌培养到最终菌种确证，每一步操作不规范都会直接导致培养失败。

在当前医保检验项目计价体系中，厌氧菌及微需氧菌培养已作为独立收费项目单独落地，精准高效的微需氧培养是提高弯曲菌检出率、保障收费合规与检测效益的核心；下面将围绕样本全流程，系统拆解从采集前处理到菌种确证的关键操作节点。

一、样本处理

1. 粪便标本

粪便标本：用采样勺收集新鲜的粪便标本（1-5g）直接装进样本采集管（含弯曲菌样本采集液4mL），充分混匀（注意要让粪便样本充分浸入液体，避免接触氧气）；

冷藏运送回实验室后，取2mL混合了标本的样本采集液于4mL的促生长增菌液中充分混匀；
放置于微需氧环境，37℃或者42℃增菌培养24h。
新鲜腹泻粪便标本可直接接种选择性培养基，微需氧（10％CO₂，5％O₂，85％N₂）环境42℃孵育72h后，挑取可疑菌落进行鉴定。

肛拭子：当腹泻患者难以留取粪便标本，肛拭子可作为替代标本用于弯曲菌分离培养。若仅有极少量粪便时，可将肛拭子直接放入1-2mL增菌液中，室温或冷藏运回实验室后，充分混匀后放置于微需氧环境，37℃或者42℃增菌培养24h。

注意：弯曲菌需要微需氧培养，沾有粪便的棉签或者肛拭子尽量全部插入液体内；标本建议4h内进行分离培养检测。
肛拭子获取的样本量有限、含菌量通常偏低，直接划线接种容易出现假阴性，因此优先进行增菌培养后，再转种至选择性平板分离目标菌株。

2.血液标本

临床血液样本取300–500mL，4℃、4000r/min 低速离心10min，弃上清，保留底部沉淀；
用BPW培养液重悬为5mL混合液；
取2mL混合液加入4mL弯曲菌增菌液混匀，用于后续微需氧培养。

空肠弯曲菌可以侵入血流，见于免疫低下人群。
怀疑弯曲菌菌血症的血液标本，不可直接涂布选择性平板，需先接种至血培养瓶进行增菌培养；
待血培养报阳后，再转种弯曲菌选择性平板开展分离。

二、分离培养

弯曲菌分离：三种选择性培养基该如何选？

依据 WS/T 498-2026《感染性腹泻实验诊断标准》附录A，标准给出三种等效可选的弯曲菌选择性培养基，实验室可结合标本情况选用，所有培养基统一培养条件：微需氧环境（10％CO₂，5％O₂，85％N₂），42℃孵育72h。

Skirrow 选择性血琼脂

可用于弯曲菌属的分离，菌落形态表现为灰色、扁平、湿润。作为含血经典培养基，营养条件好，适合临床常规新鲜粪便、肛拭样本的日常分离工作，是检验科最常使用的平板。

添加活性炭、去氧胆酸和

头孢哌酮的无血琼脂（CCDA）

针对空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、乌普萨拉弯曲菌、海鸥弯曲菌等嗜热致病弯曲菌，菌落呈灰色、扁平、湿润。适合增菌后转种，用于嗜热弯曲菌的筛查分离。

添加活性炭、头孢哌酮、万古霉素

和两性霉素B的无血琼脂

用于弯曲菌属分离；菌落多呈灰色、扁平、不规则散在分布，也可出现黏液状、湿润凸起的圆形、薄膜样，淡黄色至灰色或粉色，不溶血。配方添加两性霉素B，对真菌抑制能力更强，适合真菌污染较重的粪便标本，避免真菌过度生长覆盖目标菌落。

实操选用参考：

新鲜临床粪便、肛拭样本优先选用Skirrow选择性血琼脂；
嗜热弯曲菌筛查可选用CCDA琼脂；
遇到真菌污染严重的标本，选用含两性霉素B的活性炭无血琼脂；
疑难样本可同时接种两种培养基，降低漏检风险。

微需氧环境构建推荐使用华端厌氧微需氧培养系统：

HD-AN系列智能型·厌氧微需氧培养系统

仪器可自动抽排置换气体，一键生成厌氧、微需氧培养环境，气体浓度精度可达0.1%，避免人工配气带来的环境波动，减少假阴性，降低临床漏检风险。

系统设有专门弯曲菌培养程序，快速、精确地建立并维持5%氧气浓度的环境。无需做任何设置，点击启动即可开启运行。

多规格培养罐灵活选配，同时支持酶标板、96孔液体培养板，配套弯曲菌专用培养罐，覆盖多样化临床标本培养需求。

三、检测鉴定

挑取分离后的可疑菌落开展菌种鉴定

依据WS/T 498-2026，生化鉴定仪、MALDI-TOF质谱为常规的确证手段。可使用HD-MA系列自动微生物生化鉴定及药敏系统完成菌种鉴定，同步开展药敏检测；也可借助HD-M-Discover系列微生物质谱快速鉴定分析系统实现菌株快速确证。手工染色、氧化酶试验仅作为菌落初步筛查，不再作为最终菌种报告依据。