《生活饮用水标准检验方法》：产气荚膜梭状芽孢杆菌整体解决方案

2023年3月17日经国家市场监督管理总局（国家标准化管理委员会）批准发布GB/T 5750-2023《生活饮用水标准检验方法》系列标准，代替实施16年之久的GB/T 5750-2006 《生活饮用水标准检验方法》。

新标准将于2023年10月1日起正式实施。 GB/T 5750-2023标准历时5年，经过了3轮意见征求，有280+单位参与研制与验证，有超过500名行业专家参与的GB/T 5750修订工作，最终大功告成。

本次修订微生物指标主要内容：新增肠球菌和产气荚膜梭状芽孢杆菌两个检测指标、3种检测方法和增加菌落总数酶底物法新方法。

其中产气荚膜梭状芽孢杆菌是新增检测指标，有些老师不清楚检测过程中需要用到哪些设备，我们根据标准的要求做个简单介绍。

根据标准要求我们需要准备以下仪器和耗材：

1.  电子天平：实验室常用仪器

2.  pH计或精密pH试纸：实验室常用仪器或耗材

3.  恒温培养箱：实验室常用仪器

4.  冰箱：实验室常用仪器

5.  恒温水浴箱：实验室常用仪器

6.  显微镜：实验室常用仪器

7.  无菌吸管：实验室常用耗材或仪器

8.  无菌试管：实验室常用耗材

9.  无菌平皿：实验室常用耗材

10. 厌氧培养装置：华端生物HD-AN系列智能厌氧微需氧培养系统

11. 过滤设备：华端生物HD-F系列水中微生物膜过滤装置

12. 滤膜:实验室常用耗材

13. 无齿镊子：实验室常用耗材

其他会用到的设备：HD-C系列菌落计数仪、HD-DT系列自动样品稀释仪、HD-GM系列全自动革兰氏染色仪、HD-S系列自动培养基分装仪、HD-MA系列自动微生物生化鉴定系统

产气荚膜梭状芽孢杆菌检测流程图

一、 样品

1. 污染较轻的水样，可直接取100 ml水样进行检验。

2. 污染严重的水样，可使用0.1%缓冲蛋白胨水将水样按10倍系列稀释，取100ml进行检验。

使用华端生物HD-DT系列自动样品稀释仪：自动称重，自动按比例稀释。

二、 过滤水样

先用无菌镊子夹取无菌滤膜边缘部分，将滤膜正面朝上贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将100 ml水样注入滤器中，打开滤器阀门，在-5.07X104Pa(-0.5 个大气压)下抽滤。每次试验均需要用100 mL0.1%缓冲蛋白胨水讲行空白对照。

使用华端生物HD-F系列水中微生物膜过滤装置：配备直排泵，无需废液瓶，直排废液；火焰灭菌支架和滤杯，提高实验效率。

三、厌氧培养

过滤完水样后，关上滤器阀门，取下滤器，用无菌镊子夹取滤膜边缘部分，移滤膜倒置在SPS琼脂培养基上，滤膜截留细菌面与培养基贴紧，避免气泡产生，然后将平皿倒置于厌氧培养装置内，于36℃±1℃厌氧培养18 h~ h，计数黑色菌落数。

使用华端生物HD-AN系列智能厌氧微需氧培养系统：使用灵活、成本低，培养效果有保障，操作简单、智能。

四、 菌落计数

对滤膜上证实为产气荚膜梭状芽孢杆菌的菌落进行计数

使用华端生物HD-C系列菌落计数仪：手动菌落计数器辅助计数，操作方便；全自动菌落计数仪：软件自动计数，计数快捷、准确。

五、 细菌鉴定

用上述培养液涂片，革兰氏染色、镜检。产气荚膜梭状芽孢杆菌为革兰阳性粗大杆菌，其耐热菌株可能形成卵形芽抱,位于菌体中央或近端，其宽度一般不超过菌体宽度。

使用华端生物HD-GM系列全自动革兰氏染色仪：自动化的染色仪使革兰氏染色实验自动化、标准化，批量大时可节约大量时间。

使用华端生物HD-MA系列自动微生物生化鉴定系统：标准化的试剂操作，仪器自动判读结果，避免人工判读偏差。

六、 其他仪器

使用华端生物HD-S系列自动培养基分装仪：自动分装培养基或者其他微生物试剂，方便、快速。

使用华端生物HD-M系列微生物质谱快速鉴定仪：相比传统鉴定方式更快出结果、准确性更高、操作更简单、检测范围更广。

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